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更新時間:2024-08-17;廠商性質:經銷商;覽量:648
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腦鈉素/腦鈉尿肽 BNPxl18luck新利 免費代測
內(nei) 皮抑素 ESxl18luck新利 免費代測
內(nei) 皮素1 ET-1xl18luck新利 免費代測
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(三) 抗體(ti) 的酶標記方法及標記效果測定 1.標記方法 良好的酶結合物取決(jue) 於(yu) 兩(liang) 個(ge) 條件:即高效價(jia) 的抗體(ti) 和高活性的酶。抗體(ti) 的活性和純度對製備標記抗體(ti) 至關(guan) 重要,因為(wei) 特異性免疫反應隨抗體(ti) 活性和純度的增加而增強。在酶標記過程中,抗體(ti) 的活性有所降低,故需要純度高、效價(jia) 高及抗原親(qin) 和力強的抗體(ti) 球蛋白,使用親(qin) 和層析提純的抗體(ti) ,可提高敏感性,而且可稀釋使用,減少非特異性吸附。 酶與(yu) 抗體(ti) 交聯,常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標記抗體(ti) 的改良過碘酸鈉法簡單易行,標記效果好,特別適用於(yu) 實驗室的小批量製備。其標記程序為(wei) :將5μg HRP溶於(yu) 0.5ml蒸餾水中,加入新鮮配製的0.06 mol/L的過碘酸鈉(NaIO4)水溶液0.5ml,混勻置4℃冰箱30分鍾 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室溫放置30分鍾後加入含5(g純化抗體(ti) 的水溶液1ml,混勻並裝透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸鹽緩衝(chong) 液於(yu) 4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時(或過夜)使之結合,然後吸出,加硼氫化鈉(NaBH4)溶液( 5(g/ml)0.2ml,置4℃冰箱2小時,將上述結合物混合液加入等體(ti) 積飽和硫酸銨溶液,置4℃冰箱30分鍾後離心,將所得沉澱物溶於(yu) 少許0.02mol/L、pH7.4PBS中,並對之透析過夜(4℃),次日離心除去不溶物,即得到酶標抗體(ti) ,用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml,進行測定後,冷凍幹燥或低溫保存。 2.酶標抗體(ti) 標記效果測定:測定內(nei) 容包括酶和抗體(ti) 活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與(yu) IgG摩爾比值以及結合率。
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