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7.斑點ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）（Dot-ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）） 與(yu) 常規的微量板ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）比較，Dot-ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）具有簡便、節省抗原等優(you) 點，而且結果可長期保存；但其也有不足，主要是在結果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為(wei) ：（1） 載體(ti) 膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡後，稍加幹燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋後加入圈中，置37℃使硝酸纖維素膜*幹燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個(ge) 樣品，每個(ge) 壓圈可加抗原液1－20μl。 　　（2） 封閉 將硝酸纖維素膜置於(yu) 封閉液中，37℃感作15－30分鍾。封閉液多采用含有正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。 　　（3） 加被檢血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置於(yu) 微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應一定時間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鍾。洗滌液一般為(wei) 一定濃度的PBS-Tween溶液。 　　（4） 加酶標抗體(ti) ，37℃反應一定時間後，用洗滌液洗三次。 　　（5） 顯色 加入新鮮配製的底物液，37℃反應一定時間後，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應。 　　（6） 結果判定 以陽性、陰險血清作為(wei) 對照，膜片中央出現深棕紅色斑點者為(wei) 陽性反應，否則為(wei) 陰性反應。 　

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