1.在酶標包被板上設規範品孔10孔，在、第二孔平別離加規範品100μl，然後在、第二孔中加規範品稀釋液50μl，混勻；然後從(cong) 孔、第二孔中各取100μl別離加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔別離加規範品稀釋液50μl，xl18luck新利混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl別離加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔平別離加規範品稀釋液50ul，混勻；混勻後從(cong) 第五、第六孔中各取50μl別離加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔平別離加規範品稀釋液50μl，混勻後從(cong) 第七、第八孔平別離取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔別離加規範品稀釋液50μl，混勻後從(cong) 第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為(wei) 50μl，濃度別離為(wei) 30ng/L，20ng/L ，10ng/L，5ng/L， 2.5ng/L）。
2. 加樣：別離設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其他各步操作一樣）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，xl18luck新利然後再加待測樣品10μl（樣品終究稀釋度為(wei) 5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動混勻。
3. 溫育：xl18luck新利用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4. 溫育：操作同3。
5. 洗刷：操作同5。
6. 顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動混勻，37℃避光顯色15分鍾.
7. 加酶：每孔參加酶標試劑50μl，空白孔除外。
8. 配液：將20倍濃縮洗刷液用蒸餾水20倍稀釋後備用。
9. 洗刷：當心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗刷液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
10. 停止：每孔加停止液50μl，停止反響（此刻藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加停止液後15分鍾以內(nei) 進行。