ELISA即酶聯免疫吸附法,是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由於(yu) ELISA方法簡單,方便,靈敏,特異性強且不需要特殊設備(隻需要酶標儀(yi) 就可以),所以被廣泛應用於(yu) 各種抗原和抗體(ti) 測定。
但是影響ELISA測定的因素有很多,而其操作中需要有一定的技術要求,如操作手法,環境,樣本等,有時常可見到一些錯誤結果(即假陽性或假陰性)等,樣本的重要性關(guan) 係到整個(ge) 實驗的結果,上海極威生物為(wei) 大家解讀ELISA檢測的影響因素之一-樣本的影響
1、樣本的保存:在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會(hui) 導致本底過深、會(hui) 造成假陽性;為(wei) 避免上述問題,在測定血清標本時能新鮮采集;如果不能立即測定,根據相應的時間保存相應的溫度,5 d內(nei) 測定的血清標本可存放於(yu) 4℃,1周後測定的血清標本應-20℃低溫凍存;如凍存後融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合後再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。
2、樣本的時間:因為(wei) 塑料試管能吸附抗原物質,所以樣本長時間放在塑料管內(nei) 會(hui) 使樣本內(nei) 抗原含量下降造成假陰性。的方法是使用真空采血管;並使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會(hui) 增加OD值,EDTA、酶抑製劑(如NaN3)可抑製ELISA係統中辣根過氧化物酶活性。
3、樣本受細菌汙染:因菌體(ti) 中可能會(hui) 含有內(nei) 源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌汙染的標本同溶血標本一樣,可能會(hui) 產(chan) 生非特異性顯色而幹擾測定結果。
4、樣本的凝固:樣本凝固不全。在實驗中,有的時候心急為(wei) 了爭(zheng) 取時間快速檢測,xl18luck新利在血液還未開始凝固的時候就強行離心分離血清,導致血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集後必須使其充分凝固後再分離血清。
5、樣本溶血:溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chan) 生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞(ya) 鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從(cong) 而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,產(chan) 生假陽性[2]。所以嚴(yan) 重溶血標本禁用。