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花卉的組織培養
更新時間:2016-04-19   點擊次數:844次

    花卉繁殖,可分有性繁殖(種子繁殖)和無性繁殖(營養(yang) 器官繁殖),而近來有不少種花卉已采用組織培養(yang) 手段,這是一種新的常規繁殖方法。  
    用組織培養(yang) 的方法進行繁殖是一項先進技術,可用極少量的繁殖材料,繁殖大量的植株,並可得到去病毒的壯苗,這在某些花卉的商品中已成為(wei) 極有效的繁殖手段。 
    組織培養(yang) 早在20世紀初即已開始,已有80多年的曆史。近年發展很快,並廣泛用於(yu) 花卉登殖,現在由瓊脂培養(yang) 轉向液體(ti) 培養(yang) ,即用發酵罐深層培養(yang) ,形成微繁殖工業(ye) 。目前又在研究人造種子,把用微繁殖技術形成的不定胚和芽條用球形膠囊包裹起來,形成人造種子。這種人造種子能在適宜條件下,生長發育成植物體(ti) 。但這項技術還有很多問題需要進行研究。 
    1.和培養(yang) 條件 
    (1)培養(yang) 基成分 
    培養(yang) 基的成分主要包括無機鹽類(分大量元素和微量元素)、有機物質(即維生素等)、車長調節物質以及碳源等四大類: 
    ①無機鹽類:植物所需的元素,除碳、氫、氧由水和空氣中供給外,其他氮、磷、焊、硫、鈣、鎂、鐵等七種均需加到培養(yang) 基中;微量元素有硼、錳、鋅、鑰、鑽、碘、銅等。 
    ②有機物質:主要是維生素和氨基酸,如民和民以及煙酸等。 
    ③生長調節質:主要有細胞分裂素和生長素兩(liang) 類。目前用得較多的細胞分裂素有:激動素、玉米素乃及異戊烯基腺嘌吟等,能促進芽的分化;生長素有吲跺乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸,能促進生長。 
    ④碳源:因組織培養(yang) 時植物體(ti) 處於(yu) 他養(yang) 情況下,故必須有能源供給,主要是蔗糖。 
    (2)培養(yang) 基的種類 
    培養(yang) 基的種類很多,采用哪一種培養(yang) 基,對於(yu) 培養(yang) 是否成功有很大的關(guan) 係,在1950~19艦年初常采用White培養(yang) 基,但後來有很多新的培養(yang) 基,其中Ms是Murashige和skoog1962; ER是Erikssonl965; B5是Gambor等1968; SH是shenk和Hildebrandt l972; HE是Heller1953提出來的,見表1表2。 
    這些培養(yang) 基中MS培養(yang) 基應用zui廣泛。ER培養(yang) 基與(yu) MS培養(yang) 基相似。B5培養(yang) 基在愈傷(shang) 組織和懸浮培養(yang) 方麵做了不少試驗,對有些植物很適合,SH培養(yang) 基與(yu) B5相似。HE培養(yang) 基為(wei) 歐洲許多實驗室所用,但礦物鹽濃度稍低,應用範圍不太廣。在花卉組織培養(yang) 中用MS培養(yang) 基zui多。 
    (3)引培養(yang) 條件 
    培養(yang) 條件,按培養(yang) 對象的種類不同而有所不同,溫度條件一般在23~26℃左右的恒溫條件下。光照條件對器官形成有作用,一般範圍是1000~3000勒克司,每日12~16小時,高於(yu) 3000勒克司有強烈抑製作用。培養(yang) 室要求清潔衛生,減少汙染。 
    2.花卉組織培養(yang) 的途徑 
    在花卉組織培養(yang) 實踐中,用植物的組織或細胞培養(yang) 成植株,也就是試管培養(yang) ,可以通過三條途徑。 
    (1)通過器官發生 
    通過由培養(yang) 的組織,產(chan) 生芽及根,器官發生由於(yu) 培養(yang) 材料的不同又可分為(wei) 兩(liang) 方麵:一是培養(yang) 花卉植物的莖尖產(chan) 生大量芽,再將芽分離轉移培養(yang) 成植株;二是培養(yang) 花卉植物器官外植體(ti) 產(chan) 生不定芽,發育成植株。 
    (2)通過煎傷(shang) 組織分化成株 
    將花卉植物體(ti) 的一小片組織培養(yang) 成愈傷(shang) 組織,再誘導分化成芽和根,成為(wei) 完整植株。 
    (3)通過胚狀體(ti) 發主 
    由培養(yang) 的植株產(chan) 生愈傷(shang) 組織,再通過懸浮培養(yang) ,或直接產(chan) 生大量的胚狀體(ti) ,再發育成完整植株。 
    3.花卉組織牆養(yang) 的操作方法 
    花卉組織培養(yang) 的操作可分為(wei) 配製、消毒滅菌、接種、培養(yang) 等幾方麵。 
    (1)培養(yang) 墓配製 
    選定培養(yang) 基以後,需把大量元素、微量元素、有機物都配成母液,擴大倍數為(wei) 稀釋液,貯存備用。使用時,根據所需配製的量,在稀釋液中加一些肌醇、水解酪蛋白、蔗糖等,再加鐵鹽(需用乙二胺四乙酸二鈉(Na2一EDTA)加硫酸亞(ya) 鐵配製成螫合鐵)成營養(yang) 液,然後吸取需用量,加入培養(yang) 基中,再測其酸堿度(一般pH值在5.5~6.5之間即可),zui後加瓊脂煮沸後分裝入三角瓶或試管中,封口待用。 
    (2)消毒滅菌 
    消毒滅菌非常重要,關(guan) 係到組織培養(yang) 的成敗。汙染的途徑是器皿、用具、材料的帶菌,以及接種室的空氣、牆壁、地板等的不清潔,故必須針對所提及的幾方麵,進行嚴(yan) 密的消毒滅菌。 
    ①培養(yang) 基消毒:將配製分裝好培養(yang) 基的三角瓶或其他容器放入高壓滅菌鍋中,在15磅/英寸2的壓力下,經20分鍾高壓滅菌即可。 
    ②器皿與(yu) 用具的消毒:接種用具及玻璃器皿、洗滌材料用的無菌水,用牛皮紙包好後和培養(yang) 基一起放在高壓滅菌鍋中消毒滅菌。 
    ③接種室消毒:接種室的地麵及牆壁,在接種前後均要用1 :50的新潔爾敏濕性消毒,每次接種前還要用紫外線燈照射消毒30~60分鍾,並用70%的酒精,在室內(nei) 噴霧,以淨化空氣,zui後是超淨台台麵消毒,可用新潔爾敏擦襪及70%酒精消毒。 
    ④材料處理及消毒:花卉組織培養(yang) 取嫩莖、花托、葉柄、葉片均可,取得材料後,需先清理,去掉多餘(yu) 部分,然後衝(chong) 洗、洗滌劑洗滌、漂清後放入接種室或超淨台上,用70%的酒精浸泡半分鍾,進行表麵消毒,再在10%的漂粉溶液中消毒10分鍾左右,取出後用無菌水衝(chong) 洗4~5次,即可接種。一般材料的選擇以幼嫩部分為(wei) 好。草花用嫩莖、花托為(wei) 好;球根花卉用莖頂、鱗莖盤、鱗葉等為(wei) 好。 
    (3)接種 
    接種用的鉗子、解剖刀、接種針等均需在火焰上消毒後用,用後再消毒。將消毒好的材料置於(yu) 培養(yang) 皿中,用解剖刀切去其邊緣,再切成小塊接種在培養(yang) 基上,使組織塊與(yu) 培養(yang) 基密合,不得將材料陷於(yu) 培養(yang) 基中,接好後隨即將瓶口封好待培養(yang) 。 
    (4)培養(yang)  
    接種完畢後即可置於(yu) 培養(yang) 室,在恒溫、加光條件下進行培養(yang) ,培養(yang) 一段時間後,根據情況將材料從(cong) 誘導愈傷(shang) 組織的培養(yang) 基轉到分化培養(yang) 基(也有隻用一種培養(yang) 基就可直接誘導分化成綠苗的),zui後轉移到生根培養(yang) 基上。 
    (5)試管苗移栽 
    試管苗發根後,必須隨即轉移到栽培基質中去,這種基質可以用培養(yang) 土、蛭石、珍珠岩等配成。將試管苗從(cong) 瓶中耿出,洗去殘存的培養(yang) 基,移植到準備好的基質中去,隨即用細噴壺噴水後加玻璃或塑料罩,3~4日內(nei) 不必澆水,以後澆些清水,1周後見苗已挺直,可去罩澆培養(yang) 液(過去所用培養(yang) 基的大量及微量元素減半配成),以利生長,2~4周後可進行常規栽培。

 

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