HIV抗體(ti) 檢測是發現HIV感染的有效途徑,ELISA法是艾滋病初篩試驗室檢測HIV抗體(ti) 普遍使用的方法之一。具體(ti) 操作過程中ELISA法的影響因素較多,稍有不慎就會(hui) 降低實驗的準確性。避免諸多影響因素、保證結果準確性,才能夠充分發揮ELISA法的優(you) 點,經過多次實驗的總結和分析,這篇文章分享了相關(guan) 的經驗。
1 試劑的選擇
通常所使用的xl18luck新利或其它試劑,必須是經國家食品藥品監督管理局注冊(ce) 批準、批檢合格、臨(lin) 床評估質量優(you) 良,並且均在有效期內(nei) 使用。不同批號試劑組分不得混用,過期的試劑一律不得使用,首先提升實驗結果的可信度。
2 樣品的采集與(yu) 保存
用於(yu) 檢測的標本應保持新鮮,標本的采集應盡量避免溶血,因紅細胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質,幹擾結果,會(hui) 出現假陽性;標本如果受細菌汙染,會(hui) 因菌體(ti) 中含有內(nei) 源性過氧化物酶而出現假陽性;混濁或有沉澱的血清樣品應離心,待澄清後方可檢測,避免對結果造成影響。
用於(yu) HIV抗體(ti) 檢測的血清或血漿樣品應存放於(yu) -20 ℃以下,短期(1周內(nei) )進行檢測的樣品可存放於(yu) 2 ℃~8 ℃。融解時應上下顛倒充分混勻,動作要輕緩,避免產(chan) 生氣泡。同時應注意避免樣品反複凍融,否則會(hui) 造成樣品抗體(ti) 效價(jia) 降低,影響其結果。
3 加樣
加樣前應注意將微孔板條從(cong) 冷藏環境中取出放置室溫,待試劑平衡後方可使用,未用完者需放入有幹燥劑的密封袋中保存。整個(ge) HIV抗體(ti) 檢測必須符合《全國艾滋病檢測技術規範》,嚴(yan) 格防止交叉感染。操作時必須戴手套、穿工作衣,嚴(yan) 格執行消毒隔離製度。
加樣要用微量移液器(要求準確性高並定期進行校正),按規定的量加入孔內(nei) ,避免加在孔壁的邊緣,垂直加樣,不要使吸頭碰到酶標板孔上的已包被的抗原,加樣時盡量慢吸快放,同時注意不要濺出,避免產(chan) 生氣泡。
每次加樣都要更換吸頭,做到一樣一吸頭,防止發生交叉汙染,幹吸頭預先在血清中抽吸3次,以便保證加樣量的準確性。滴加試劑應先將滴瓶搖勻並擠去*滴後再進行滴加,以免產(chan) 生氣泡。
4 溫育
抗原抗體(ti) 反應需要在一定的溫度下(zui適溫度為(wei) 37 ℃),經過一定的時間才能達到反應的平衡點。溫育一般采用能使反應液溫度迅速達到平衡的水育法,一種是放在水育箱的隔板上,另一種是放在溫箱的濕盒內(nei) ,水要浸至板條的1/3處,不可將板條疊加放置,以保證各板的溫度平衡一致。
5 洗板
由於(yu) 待檢血清中可能有HIV病毒的存在,采用ELISA法進行檢測HIV抗體(ti) 時,盡量使用洗板機洗板,一方麵可以確保檢測人員的安全,另一方麵可以防止環境汙染。洗板在ELISA檢測中是一個(ge) 非常重要的環節,洗板的合格與(yu) 否直接影響檢測結果的準確性。因此,洗板時一定要先放好,洗滌開始時注意觀察洗板機上的每個(ge) 吸液針是否都一致地插入孔底,並且將孔內(nei) 液體(ti) 全部吸幹,按說明書(shu) 要求設置浸泡的時間以及洗滌的次數。洗滌結束後進行拍板,同時要用蒸餾水衝(chong) 洗管道,避免由於(yu) 洗液的結晶而造成管道堵塞。同時要注意各種xl18luck新利的洗滌液不可混用。
6 顯色與(yu) 觀察結果
按照說明書(shu) 規定的時間、溫度恒定、反應後終止,並在顯色反應終止後立即用酶標儀(yi) 進行比色。
7 小結
在加液與(yu) 混勻過程中不應產(chan) 生氣泡,否則會(hui) 使測定的OD值偏高,易出現假陽性結果。
ELISA法是艾滋病初篩試驗室檢測HIV抗體(ti) 普遍使用的方法,選擇合格的試劑和儀(yi) 器,操作中嚴(yan) 格按照xl18luck新利說明書(shu) 要求實驗,這樣就能保證檢測結果的準確性。