此法曾用於(yu) 乳癌細胞的培養(yang) ,具體(ti) 程序是:
(1)先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1:1)混合液漂洗細胞一次,然後再換成新的混合液繼續消化,並在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養(yang) 瓶,到半數細胞脫落下來後,便立即停止消化;
(2)把消化液吸入離心管中,離心去上清,吸入另瓶中,加培養(yang) 液置溫箱中培養(yang) ;向原瓶內(nei) 也補加新的液繼續培養(yang) 。用此法處理後,成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落。經過幾次反複處理,可能把成纖維細胞除淨。
本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為(wei) 敏感的特點,通過消化進行選擇。
(1)可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理,邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,當發現成纖維細胞被除掉後,即終止消化;
(2)用Hanks洗滌處理一次後,更換新液,繼續培養(yang) ,可獲純淨腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除淨,可再次重複。