產(chan) 品及特點 本試劑盒是用於(yu) 質粒DNA小量製備與(yu) 純化的試劑盒。菌體(ti) 先經堿裂解法處理，再通過離心吸附柱，專(zhuan) 一結合DNA，zui後洗去雜質，快速提取質粒DNA，全套操作可以在30分鍾之內(nei) 完成。使用本試劑盒可從(cong) 1-5 mL過夜培養(yang) 的菌液純化得到高達20 ug的高純度質粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用於(yu) 酶切、轉化、測序及PCR等。
1. 快速、步驟少，整個(ge) 操作在半個(ge) 小時之內(nei) 完成。
2. 不需要預平衡離心吸附柱。
3. 洗柱液即開即用，不需要額外加乙醇。
4. 純度高，采用本試劑盒提取的質粒OD比值在1.8-2.0之間。
5. 產(chan) 量高，每毫升過夜培養(yang) 的細菌可以提取到2-5 ug/mL。
6. 用途廣，適用於(yu) 低拷貝和高拷貝質粒。
7. 價(jia) 格低，比多數國內(nei) 同類產(chan) 品的價(jia) 格更便宜。
規格及成分 成 份 50次大紙盒包裝 100次大紙盒包裝
溶液A（CAT#:6020） 13 mL 26 mL
溶液B（CAT#:60205B） 13 mL 26 mL
溶液C（CAT#:60205C） 18 mL 36 mL
RNase A溶液,10mg/mL
（CAT#:3160） 0.15 mL 0.3 mL
通用洗柱液（CAT#:60408） 50 mL 100 mL
DNA洗脫液2.0
（CAT#:111205） 10 mL 10 mL
離心吸附柱（CAT#:90303） 50隻 100隻
離心吸附柱套管（CAT#:90511） 50隻 100隻
使用手冊(ce) 1份 1份

運輸及保存 常溫運輸和保存，RNase A需要-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 無
使用方法 1. 先將全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，搖勻後再取用，未用完的溶液A在4℃保存。
2. 從(cong) 篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yang) 基中，37℃震蕩培養(yang) 12-16小時（搖床轉速200-300）。注意：建議使用LB培養(yang) 基，營養(yang) 更豐(feng) 富的培養(yang) 基會(hui) 使菌體(ti) 濃度過高，超過純化係統處理能力而降低DNA質量。另外，延長培養(yang) 時間有利於(yu) 提高質粒DNA濃度，但是菌液培養(yang) 過長時間會(hui) 因細胞死亡、裂解而造成質粒DNA濃度降低。
3. 用1.5 mL離心管收集1-4 mL過夜培養(yang) 飽和菌液，室溫12,000 rpm離心1分鍾，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體(ti) 。
4. 加入250 uL溶液A，用槍頭充分吹打使菌體(ti) 重懸（此步在冰上操作效果更佳）。注意：細胞未充分懸浮會(hui) 影響後續操作，可以使用漩渦振蕩器幫助混勻或使用Tip吸頭吹打沉澱至*混勻。
5. 加入250 uL溶液B（如果溶液B有沉澱，用前須37℃加熱溶解後冷卻到室溫方可使用），溫和反複顛倒混勻4-6次，看到溶液變粘即可，然後冰上放置不超過4-5分鍾。注意：此步處理不能超過5分鍾，否則DNA的堿損傷(shang) 比較嚴(yan) 重。同時千萬(wan) 不要劇烈振蕩，否則基因組DNA斷裂產(chan) 生的片段非常容易汙染質粒DNA。溶液B用後需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會(hui) 進入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。
6. 加入350 uL冰上預冷的溶液C，反複顛倒混勻4-6次，可見白色沉澱物產(chan) 生，然後冰上放置至少5分鍾。
7. zui高轉速（12,000 rpm以上）4℃離心5分鍾，小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由於(yu) 此時的溶液比重較大，有時候出現沉澱漂浮是正常現象，取上清時避開漂浮的沉澱即可。如果此步的離心在室溫進行，更容易出現沉澱物漂浮的現象。
8. 靜置2分鍾以讓質粒DNA與(yu) 吸附柱充分結合，此步十分重要。
9. 室溫12,000 rpm離心1分鍾，棄收集管中的廢液。
10. 加入500 uL的通用洗柱液，室溫12,000 rpm離心1分鍾，棄收集管中廢液。注意：通用洗柱液中含乙醇，用後需要將蓋擰緊存放，否則乙醇會(hui) 揮發。
11. 重複上步1次。
12. 室溫12,000 rpm離心1分鍾，甩幹殘留液體(ti) 。此步不能省略，否則殘留乙醇會(hui) 影響DNA的後續使用（如DNA上樣時不能沉澱到加樣孔中）。
13. 將離心吸附柱置於(yu) 一個(ge) 新的1.5 mL塑料離心管（自備）中，加入30-100 uL 65-80℃預熱的DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鍾。常溫的DNA洗脫液2.0也可以用於(yu) 洗脫，但產(chan) 量稍微有所降低。
14. 室溫12,000 rpm離心1分鍾，離心管底溶液即質粒DNA。
15. 由於(yu) 天澤基因的吸附柱結合DNA能力較強，如果再加適量DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中，往往還能洗脫下很多質粒DNA（相當於(yu) *次洗脫的20-30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脫液2.0來洗脫。