免疫組化染色的標準程序可以用於(yu) 對果蠅類抗原的定位。一般而言，果蠅類標本染色的成功與(yu) 否依賴於(yu) 本章開始和第五章所討論的原則。果蠅類標本免疫染色的複雜性在於(yu) 其不同發育階段出現不同的保護衣殼，包括以下結構：絨毛膜、卵黃膜和角質層。它們(men) 均是特定階段的自身環境保護屏障，在發育和生存中起著重要的作用，就方法而言，去除這些結構有利於(yu) 抗體(ti) 的透入，且不應改變所研究的抗原特性。因此，在設計果蠅類標本免疫染色的方案中應該考慮使背景降至zui低的程度，對抗體(ti) 的選擇尤其關(guan) 鍵。

             果蠅類標本免疫染色的方法可以分為(wei) 兩(liang) 個(ge) 步驟。*步為(wei) 處理標本，包括固定和透化處理組織或整個(ge) 器官。要求處理條件強烈，以便去除果蠅類的保護衣殼、固定抗原以及有利於(yu) 抗體(ti) 透入。固定和透化方法的選擇可依據果蠅類發育的不同階段而定。在形成角質層前的胚胎早期，可用有機溶劑、甲醛和醇類的混合物固定和透化組織，以便抗體(ti) 易於(yu) 透入。正常情況下超聲處理可以打開角質層。本章介紹的固定方法包括整個(ge) 胚胎發育的早期和晚期。來自發育晚期的組織通常先被破碎成碎片，然後按標準的多聚甲醛／去汙劑法固定和染色。

    果蠅類標本染色的第二步是加入一抗及檢測。一抗的加入及檢測與(yu) 後續的二抗染色有關(guan) ，但僅(jin) 有一點不同的是在zui後染色中取決(jue) 於(yu) 所需分辨水平。大多數抗原定位實驗使用酶標記的二級試劑。這種方法靈敏度高，並且不需要共聚焦顯微鏡。如要求更高的分辨率或需在同一樣本中觀察兩(liang) 種抗原時，則采用熒光染料標記的二抗試劑。由於(yu) 果蠅類標本較厚，要求使用共聚焦顯微鏡觀察染色結果，且依賴於(yu) 良好的共聚焦設備。以下分別討論這兩(liang) 部分技術。