使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與(yu) 預培養(yang) 按照樣品的采集與(yu) 預培養(yang) 按照《食品衛生微生物學檢驗阪崎腸杆菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置於(yu) 滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍稀釋度為(wei) 例）

1. 注意：由於(yu) 標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬(wan) 不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分）。為(wei) 增加產(chan) 品穩定性和避免擴散傳(chuan) 染性病原，本產(chan) 品不提供活體(ti) 樣品做陽性對照，隻提供可以直接使用的 DNA段作為(wei) 陽性對照。

2. 標記 6 個(ge) 離心管，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鍾，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鍾，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鍾，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重複上麵的操作直到得到 6 個(ge) 稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

注：上述樣品建議經過增菌後，收集培養(yang) 物用於(yu) 檢測。 

二、DNA提取：

可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chan) 的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(ye) 化產(chan) 品，並按照相應試劑盒說明進行操作。

1、液體(ti) 培養(yang) 物：取液體(ti) 培養(yang) 物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。

2、固體(ti) 培養(yang) 物：挑取單克隆菌落與(yu) 50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。

3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便於(yu) 滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鍾，棄上清，沉澱中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。

4、其他液體(ti) 標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉澱中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。

注：陽性對照和陰性對照為(wei) 已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體(ti) 係中即可。由於(yu) 陽性對照濃度較高，建議在樣品製備區域加入陽性對照。 

ANGL2血管生成素樣蛋白2抗體(ti)

Angiopoietin 4血管生成素3/血管生成素4抗體(ti)

Annexin I膜粘連蛋白 I抗體(ti)

Annexin A2膜粘連蛋白 Ⅱ抗體(ti)

ATF1活化轉錄因子1抗體(ti)

Aquaporin 4 水通道蛋白4抗體(ti)

ATF2活化複製因子2抗體(ti)

AMPK beta 1腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體(ti)

Amylin糖尿病相關(guan) 肽/胰島澱粉樣肽抗體(ti)

Angiotensin II血管緊張素Ⅱ抗體(ti)

AT2R血管緊張素Ⅱ受體(ti) 1抗體(ti)

Angiopoietin-1血管生成素-1抗體(ti)

Annexin V膜粘連蛋白5抗體(ti)

Annexin V重組膜粘連蛋白5抗體(ti)

alpha Adaptin銜接蛋白α-Adaptin抗體(ti)

APAF1凋亡蛋白活性因子-1抗體(ti)

APAF1凋亡蛋白活性因子-1抗體(ti)

ABCG2三磷酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員2抗體(ti)

APOE載脂蛋白E抗體(ti)

Amyloid Precursor Protein澱粉樣肽前體(ti) 蛋白抗體(ti)

Aquaporin 2水通道蛋白-2抗體(ti)

AGT血管緊張素原抗體(ti)

Androgen receptor雄激素受體(ti) 抗體(ti)